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以大肠杆菌质粒DNA的提取和重组为例阐述基因工程的基本步骤。

题目

以大肠杆菌质粒DNA的提取和重组为例阐述基因工程的基本步骤。

参考答案和解析
正确答案:①从细胞中分离出DNA；
②限制酶截取DNA片段；
③分离大肠杆菌中的质粒；
④DNA重组；
⑤用重组质粒转化大肠杆菌；
⑥培养大肠杆菌克隆大量基因。
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第1题：

下列对DNA克隆操作的描述哪一项是错误的

A．限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子

B．载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组1DNA

C．除质粒外，λ噬菌体可作为重组DNA的载体

D．筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行

E．以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主DNA结合


正确答案：E

第2题：

下列关于基因工程的叙述中，不正确的是（）

  • A、重组DNA是在体外进行的
  • B、基因工程又叫做重组DNA技术
  • C、基因工程是现代生物技术的核心
  • D、基因工程的受体细胞必须是大肠杆菌等原核生物

正确答案:D

第3题：

基因工程操作的基本步骤()

A.目的基因的获得

B.重组DNA的形成

C.重组DNA导入受体细胞

D.筛选含有目的基因的受体细胞


答案：ABCD

第4题：

基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）

  • A、人工合成基因
  • B、制备重组DNA分子
  • C、目的基因导入受体细胞
  • D、目的基因的检测和表达

正确答案:C

第5题：

基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）

  • A、人工合成基因
  • B、制备重组DNA分子
  • C、转化受体细胞
  • D、目的基因的检测和表达

正确答案:C

第6题：

某一质粒载体如图6所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述三种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是____；并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的，其原因是____。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自____。


答案：
解析：
(1)能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点(答出两点即可) (2)二者均不含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上都不能生长：二者都含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长；四环素
(3)受体细胞
解析：(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有：能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
(2)依题意可知，目的基因插入位点在Tetr中，导致四环素抗性基因(TEtr)失活，而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞,因二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长,所以是不能区分的；含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞，因二者都含氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上都能生长,因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基；因目的基因插入后，导致四环素抗性基因失活，含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长，而含有质粒载体的则能正常生长。
(3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时，噬菌体的DNA进入到细菌细胞中，而其蛋白质外壳留在细胞外；在噬菌体DNA的指导下，利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞，即大肠杆菌。

第7题：

下列关于基因工程的叙述，错误的是（）

  • A、通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的DNA，用另一种处理质粒的DNA
  • B、DNA连接酶和载体是构建重组质粒必需的工具酶
  • C、可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒
  • D、质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种颗粒状的细胞器

正确答案:A,B,D

第8题：

进行基因工程实验时，常用的技术有

A．分子杂交技术

B．DNA探针技术

C．质粒重组技术

D．基因调控技术


正确答案：ABC
解析：进行基因工程实验时，常用的技术有分子杂交技术(包括DNA探针技术)和质粒重组技术。基因调控技术不属于实用技术，是个生化概念。

第9题：

基因工程的“四步曲”中未发生碱基互补配对的是（）

  • A、用PCR扩增抗病毒基因
  • B、将人的胰岛素基因与大肠杆菌质粒结合，形成重组质粒
  • C、将重组质粒导入受体细胞
  • D、抗病毒基因的表达

正确答案:C

第10题：

对人类糖尿病的基因治疗研究大致步骤如下，由此可知（） ①提取目的基因 ②将目的基因与质粒结合为重组质粒 ③将重组质粒导入大肠杆菌 ④重组质粒在菌体内增殖 ⑤分离重组质粒，提取目的基因 ⑥将目的基因与某种病毒结合为重组DNA ⑦将重组DNA导入人体有基因缺陷的细胞 ⑧目的基因的检测和表达

  • A、过程①目的基因应来自患者本人
  • B、过程④是为了修饰基因
  • C、过程②、⑥在细胞内进行
  • D、目的基因导入不同受体细胞目的不同

正确答案:D

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