分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些?

题目

分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些?

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相似问题和答案

第1题:

影响酶促反应的因素有哪些?


正确答案: 影响酶促反应的因素有:酶浓度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和离子强度及温度、激活剂和抑制剂以及某些其他因素。

第2题:

简述切空变过电压的影响因素有哪些?


正确答案:断路器的性能、电容C的影响、电感L的影响。

第3题:

影响酶活性的因素有哪些?


参考答案:凡能影响蛋白质的理化因素都能影响酶的活性。因此温度、酸碱度、重金属离子都能影响酶的活性。高温、强酸、强碱等因素均可引起酶丧失催化能力。

第4题:

试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素?


正确答案: 外因:是可以预见的,如反应条件(缓冲液、反应温度、反应时间、终止酶切的方法)、底物的纯度(是否有杂质、是否有盐酚的污染)、何时加酶、操作是否恰当、反应体积等等;
内因:星星活性、末端长度、位点偏爱、甲基化底物、底物的构象。

第5题:

限制性内切核酸酶的特点与使用注意事项有哪些?


正确答案: 一类专门切割DNA的酶,它们能特异结合一段被称为限制酶识别顺序的特殊DNA序列。并切割dsDNA。
所谓限制(restriction)=切割(clearagE.=水解(hydrolysis)该部位的核苷键(磷酸二酯键)限制酶都是从原核生物中发现的(400多种E/350M)。所有的限制酶可分成3类。
(1)Ⅰ、Ⅲ型,兼具限制与修饰活性,它们识别与切割顺序不在一个地方,不产生特异性的DNA片段,与基因工程意义不大(有说Ⅲ型识别核苷酸切割的位点一致,但罕见)。
(2)Ⅱ型基因工程说到的限制酶是Ⅱ型酶,具有此类酶的微生物限制-修饰系统分别由限制酶和甲基化酶来完成。Ⅱ型酶分子量小,仅需Mg2+作为催化反应的辅因子,识别与切割位点相同,产生特异的DNA片段。

第6题:

影响光度分析的因素有哪些?


正确答案: (1)显色剂选择是否恰当;(2) 显色反应条件即试剂的浓度、显色时间是否适宜等对光度分析的准确性都有着重要的影响。

第7题:

酶的提取方法有哪些?影响酶提取的主要因素有哪些?


正确答案:根据酶提取时所采用的溶剂或溶液的不同,酶的提取方法主要有盐溶液提取、酸溶液提取、碱溶液提取和有机溶剂提取等。
①盐溶液提取法:蛋白质在低浓度盐溶液中,其溶解度会随着盐溶液浓度的升高而增加,这种现象称为盐溶这是因为蛋白质分子吸附某种盐类离子后,带电表层使蛋白质分子彼此排斥,而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强,因而溶解度提高。
②酸溶液提取法:有些酶在酸性溶液中的溶解度比较大,且比较稳定,这类酶宜采用酸溶液提取,PH一般控制在2—6,针对酶的性质选择合适的PH,避免PH过低引起酶失活。
③碱溶液提取法:有些酶在碱性溶液中的溶解度比较大,且比较稳定,这类酶宜采用碱溶液提取,PH一般控制在8—12,针对酶的性质选择合适的PH,避免PH过高引起酶失活。
④有机溶剂提取法:一些和脂类结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的酶蛋白难溶于水、稀盐、稀酸或稀碱中,则常用能够与水混溶的有机溶剂提取,如乙醇、丙酮、丁醇等。酶主要是蛋白质,影响蛋白质提纯的因素同样会影响酶的提纯,而在酶提取过程中最重要的就是要防止酶的变性失活。影响酶提取的最主要因素是酶在所用溶剂中的溶解度及酶向溶剂中扩散的难易。此外,在提取过程中还要注意一下因素的影响:
(1)温度:为防止酶的变性失活,提取时温度不宜过高。特别是采用有机溶剂提取时,整个提取操作应尽可能在低温下进行。
(2)PH:酶提取液的PH首先应保证蛋白质稳定,为了增加酶的溶解度,提取时溶液的PH应远离酶的等电点。(3)搅拌:搅拌能促进酶在提取液中的溶解,一般采用温和搅拌为宜,速度太快易产生大量气泡,增大了与空气的接触面,会引起酶蛋白的变性失活。
(4)污染:酶液是微生物生长的良好培养基,在提纯过程中应尽可能防止微生物对酶的破坏。
(5)提取液的体积:提取液的用量增加可提高提取率。但过量的提取液,使酶浓度降低,对进一步分离纯化不利。所以提取液的用量一般为含酶原料体积的3—5倍,少量多次,以得到较好的提取效果。

第8题:

分析影响创造性的因素有哪些?


正确答案:
(1)环境
家庭与学校的教育环境是影响个体创造性的重要因素。父母的受教育程度、管教方式以及家庭气氛等都在不同程度上影响孩子的创造性。
在学校教育方面,如果学校气氛较为民主,教师不以权威方式管理学生;教师鼓励学生的自主性,容许学生表达不同意见;学习活动有较多自由,教师容许学生在自行探索中去发现知识,那么,这种教育有利于创造性的培养。
(2)智力 
研究表明,创造性与智力的关系并非简单的线性关系,二者既有独立性,又在某种条件下具有相关性,其基本关系表现在以下几个方面:
①低智商不可能具有创造性;
②高智商可能有高创造性,也可能有低创造性; 
③低创造性的智商水平可能高,也可能低;
④高创造性者必须有高于一般水平的智商。 
上述关系表明,高智商虽非高刨造性的充分条件,但可以说是高创造性的必要条件。 
(3)个性
一般而言,创造性与个性二者之间具有互为因果的关系。综合有关研究,高创造性者一般具有以下一些个性特征:
①有幽默感;
②有抱负和强制的动机;
③能够容忍模糊与错误;
④喜欢幻想; 
⑤具有强烈的好奇心;
⑥具有独立性。

第9题:

分析影响酶切的因素。


正确答案: 1)DNA的纯度:DNA等都会影响酶的活性。
2)DNA的甲基化程度:dam甲基化酶(修饰GATC中的A.;dcm甲基化酶(修饰CCA/TGG的C.。
3)温度:不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37oC,少数要求40-65oC。
4)缓冲液(Buffer):是影响限制酶活性的重要因素。

第10题:

分析影响限制性内切酶酶切的因素有哪些?


正确答案: (1)温度:大部分限制性内切酶最适反应温度为37℃,少数酶高于或低于这个温度。
(2)时间:合适,大多为1h,可过夜反应。
(3)溶液体系:要求有稳定的pH环境。标准的缓冲溶液中含有氯化钙、氯化镁或氯化钾、Tris-HCl、β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)以及牛血清蛋白质(BSA)和Mg2+,具有一定的酸碱值即pH值。
(4)盐离子浓度:不同的限制性内切酶对盐离子强度(Na+)有不同的要求,一般按离子强度不同分为低(0mmol/L)、中(50mmol/L)、高盐(100mmol/L)三类。Mg2+也是限制性内切酶酶切反应所需。
(5)反应体积和甘油浓度:在进行酶切反应时,加酶的体积一般不超过总反应的10%,若加酶体积太大,甘油浓度过高,则会影响酶切反应。
(6)DNA的纯度和结构:DNA样品中所含的蛋白质、有机溶剂及RNA等杂质均会影响酶切反应速度和酶切的完全度,酶切的底物一般是双链DNA,DNA的甲基化位置会影响酶切反应。