蛋白质定向进化方法有哪些？

题目

蛋白质定向进化方法有哪些？

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相似问题和答案

第1题：

蛋白质有哪些分类方法，每一种分类中对蛋白质如何分类。

正确答案: （一）按分子组成分类：1.简单蛋白2.结合蛋白
（二）按分子形状分类：1.球状蛋白2.纤维状蛋白
（三）按功能分类：
1.结构蛋白：为细胞提供结构支撑
2.转运蛋白：控制物质在细胞膜内外的运输
3.调节蛋白：控制蛋白活性及基因功能表达
4.信号蛋白：包括细胞表面受体蛋白及传递细胞外信号外的蛋白
5.运动蛋白：控制细胞运动
6.酶蛋白：催化细胞内外的化学反应

第2题：

色谱方法共分几类？常用的蛋白质分离方法有哪些？

正确答案: （1）按溶质分子与固定相相互作用的机理不同，色谱分离可大致分成如下5大类：吸附色谱分离，分配色谱，离子交换色谱，凝胶色谱，亲和色谱。
（2）根据固定相的形状不同，色谱分离技术可分为柱色谱分离、纸上色谱分离、薄层色谱分离。
（3）根据流动相的物态不同，色谱分离技术可分为气相色谱分离、液相色谱分离、超临界色谱分离。
（4）根据操作压力不同，色谱分离技术不同可分为低压色谱分离、中压色谱分离、高压色谱分离。

第3题：

生物样本分析前为什么要除去蛋白质?常用去蛋白质的方法有哪些?

正确答案：
(1)除蛋白质的意义使结合型药物释放出来以测定总浓度。得到较“干净”的提取液减少乳化。消除对测定的干扰。(2)常用去蛋白质方法：蛋白质沉淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包括加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等如三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。组织酶消化法——蛋白水解酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。

第4题：

食物蛋白质有哪些评价方法？

正确答案:不同蛋白质由于化学组成、形状差别，消化率和生物利用也有所不同，所以评价一种蛋白质质量的优劣，首先必需了解和测定蛋白质的含量、氨基酸组成，然后通过氨基酸评分模式、氨基酸评分（AAS）、经消化率校正后的氨基酸评分（PDCAAS）、蛋白质功效比值、蛋白质生物价、蛋白质净利用率等方法完成对氨基酸数量和比例以及蛋白质营养价值的评价。

第5题：

常用的蛋白质沉淀方法有哪些？有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么？用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

正确答案: ①常用的蛋白质沉淀方法有：
蛋白质盐析沉淀、蛋白质等电点沉淀、有机溶剂沉淀法及运用沉淀动力学沉淀法等。
②有机溶剂沉淀蛋白质的机理是：
向蛋白质溶液中加入有机溶剂，水的活度降低。随着有机溶剂溶度的增大，水对蛋白质分子表面荷电基团的水化程度降低，液体的介电常数下降，蛋白质分子间的静电引力增大，从而凝聚和沉淀。
③用乙醇沉淀蛋白质时应注意的事项：
1、低温条件下操作可以提高收率和减少蛋白质失活变性（加入有机溶剂为放热反应）；
2、采用的有机溶剂必须与水互溶，与蛋白质不发生作用；
3、蛋白质分子量越大，需要加入的溶剂量越少；
4、一种蛋白质的溶解度常会因为另一种蛋白质存在而降低；
5、沉淀的蛋白如果不能再被溶解，可能已经变性；
6、很多酶和蛋白质在20-50%（V/V）就能产生沉淀；当溶剂量达到50%时，通常只有分子量≤1500的蛋白留在溶液中；
7、PH=PI时，需要加入的溶剂量减少；
8、盐析法沉淀的蛋白质采用有机溶剂精制时必须与先进行透析。

第6题：

常用的蛋白质沉淀方法有哪些？

正确答案: ⑴盐析法
⑵有机溶剂沉淀法
⑶等电点沉淀法
⑷选择性变性沉淀法
⑸有机聚合物沉淀法

第7题：

蛋白质沉淀方法有哪些？

正确答案: （1）加入中性盐盐析
（2）加入可溶性有机溶剂
（3）将PH值调节到等电点
（4）加入非离子型亲水性聚合物
（5）加入聚电解质絮凝
（6）加入多价金属离子等

第8题：

生物样品测定前为什么要除去蛋白质？除去蛋白质的常用方法有哪些？

正确答案: 去蛋白质的意义：使结合型药物释放出来，以便测定药物的总浓度；得到较“干净”的提取液，减少乳化，消除对测定的干扰；保护仪器，延长使用期限。
常用的方法：
1）蛋白质沉淀法
A.生成不溶性盐
加入酸类（TCA、HClO₄等）
加入重金属盐（Zn²⁺ 、Cu²⁺ 、Ag⁺ ）
B.盐析和脱水
加入中性盐（（NH₄）₂SO₄、NaCl ）
加入与水混溶的有机溶剂（甲醇、乙腈、丙酮）
2）组织酶消化法（蛋白水解酶）
酶消化法是在一定的pH范围、一定的温度和一定的反应时间下完成的。
其特点是：水解条件温和，水解效率高，无乳化生成。
有时可合用一些蛋白酶增活剂，以减少酶用量和缩短消化时间。

第9题：

什么是蛋白质的沉淀作用？有哪些沉淀蛋白质的方法？各方法沉淀的机理是什么？

正确答案: 蛋白质在水溶液中可形成亲水的胶体，蛋白质从胶体溶液析出的现象称为蛋白质沉淀作用。
沉淀蛋白质的方法有：
盐析法：在蛋白质溶液中加入高浓度的强电解质溶液如硫酸铵、硫酸钠等，蛋白质
从溶液中产生沉淀。
机理：破坏了蛋白质分子表面的水化膜和双电层（净电荷），蛋白质溶液失去
稳定性而产生沉淀。
有机溶剂沉淀法：乙醇、丙酮等有机溶剂可使蛋白质产生沉淀。
机理：降低溶液的介电常数，也破坏了蛋白质的水化膜，蛋白质产生沉淀，
但必须低温操作，以防止蛋白质的变性。
等电点沉淀法：用稀酸或稀碱调节蛋白质的溶液于某蛋白质等电点处，该蛋白质沉淀析出。
机理：中和蛋白质表面水化膜。
重金属沉淀法：蛋白质在等电点以上的pH下，易于重金属产生沉淀。
机理：重金属与带负电的蛋白质羧基结合产生不可逆沉淀。

第10题：

酶分子定向进化的主要方法有哪些？

正确答案:（1）易错PCR（error-pronePCR）可以用Mn2＋来替代Mg2＋，使PCR时发生突变。
（2）DNA重组（改组）（DNAshuffling）
重组可以在同一基因的不同突变体之间进行，也可以在不同物种的同源基因间进行。因此，DNA重组就是把不同来源的同源基因断裂成不同大小的片段，然后对这些片段进行重新组合。
（3）随机引物体外重组
（4）交错延伸法（Staggeredextensionprocess）

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