酶体外定向进化过程中产生随机突变的策略有哪些?什么是易错PCR?

题目

酶体外定向进化过程中产生随机突变的策略有哪些?什么是易错PCR?

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相似问题和答案

第1题:

何谓易错PCR技术?简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程


正确答案:指从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行PCR,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。
过程:双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

第2题:

什么是酶的体外定向进化,什么是DNA改组(DNA shuffling).


正确答案:所谓酶的体外定向进化,又称实验分子进化,属于蛋白质的非合理设计,它不需事先了解酶的空间结构和
催化机制,通过人为地创造特殊的条件,模拟自然进化机制(随机突变、重组和自然选择),在体外改造酶基因,并定向选择出所需性质的突变酶。
DNA改组(DNA shuffling)又称有性PCRDNA或DNA重排,是运用随机突变技术,对某种感兴趣的蛋门质或核酸进行快速的改造,并定向选择所需性质的生物分子的方法。

第3题:

什么是酶的体外定向进化,原理及一般流程。


正确答案:酶的体外定向进化,又称实验分子进化,属于蛋白质的非合理设计,它不需事先了解酶的空间结构和催化机制,通过人为的创造特殊的条件,模拟自然进化机制(随机突变、重组和自然选择),在体外改造酶基因,并定向选择出所需性质的突变酶。
原理:在待进化酶基因的PCR扩增反应中,利用TaqDNA聚合酶不具有3’->5’校对功能的性质,配合适当条件,以很低的比率向目的基因中随机引入突变,构建突变库,凭借定向的选择方法,选出所需性质的优化酶(或蛋白质)。从而排除其他突变体。
流程:
1.因的选择:选择编码所需蛋白质的DNA序列
2.变或重组:通过易错PCR引入随即突变或DNAShuffling等方法增加基因序列的多样性。
3.变基因文库的构建:将获得的突变重组基因插入到表达载体中的构建突变库。
4.变体酶的表达:将载体转入受体细胞表达变异酶。
5.的基因鉴定:利用筛选和选择方法确定有益的特性克隆。
6.离改良基因并重复上述过程,直至获得所需性质的蛋白质。

第4题:

酶分子定向进化的方法有()

  • A、盒式突变
  • B、易错PCR
  • C、DNA改组技术
  • D、随机引物体外重组法
  • E、大引物突变法

正确答案:B,C,D

第5题:

关于定向进化和定点突变的叙述正确的是()

  • A、定向进化的突变是随机的,不确定的
  • B、定向进化的突变位点的数目是不确定的,但突变的个数可预知
  • C、定向进化的效应是可预知的
  • D、定点突变的突变位点是不确定的
  • E、定点进化的突变效应一定是已知的

正确答案:A

第6题:

关于酶分子定向进化的基本方法叙述不正确的是()

  • A、随机引物体外重组法需用DNA酶消化模板链产生随机大小片段
  • B、DNA重组技术可用超声波切割产生不同的DNA小片段
  • C、连续易错PCR方法中调整4种dNTP的浓度可提高突变率
  • D、相对于定点突变,筛选正向突变难度加大E交错延伸PCR主要特点是将PCR中的退火和延伸合二为一

正确答案:A

第7题:

酶分子定向进化的主要方法有哪些?


正确答案:(1)易错PCR(error-pronePCR)可以用Mn2+来替代Mg2+,使PCR时发生突变。
(2)DNA重组(改组)(DNAshuffling)
重组可以在同一基因的不同突变体之间进行,也可以在不同物种的同源基因间进行。因此,DNA重组就是把不同来源的同源基因断裂成不同大小的片段,然后对这些片段进行重新组合。
(3)随机引物体外重组
(4)交错延伸法(Staggeredextensionprocess)

第8题:

目的酶基因的DNA区段一侧含有一酶切位点,可用什么方法对酶分子进行改造()

  • A、寡核苷酸引物突变法
  • B、盒式突变
  • C、PCR定点突变法
  • D、大引物突变法

正确答案:A,C,D

第9题:

酶定向进化是在体外进行酶基因的(),然后在人工控制条件的特殊环境下进行(),而得到具有优良催化特性的酶的突变体。


正确答案:人工随机突变;定向选择

第10题:

简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程。


正确答案:易错PCR是从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行聚合酶链式反应,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。
PCR:双链DNA的变性(解链)、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。易错PCR在原有基础上提高镁离子的浓度、添加一定浓度的锰离子、改变4种底物的浓度比等反应条件,使DNA聚合酶在催化基因扩增时,增加碱基配对错误的出现频率,而引起基因突变。易错PCR技术所引起的基因突变和遗传进化仅在单一分子内发生,所以属于无性进化。

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