什么是酶的体外定向进化，什么是DNA改组（DNAshuffling）

题目

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第1题：

需要连接酶的是

A．DNA复制时

B．DNA损伤修复时

C．DNA的体外重组

D．RNA的转录

正确答案：ABC
解析：DNA连接酶连接DNA链3;-OH末端和另一DNA链的5'-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。复制中子链分段合成，是不连续的，最后总留有缺口，要靠连接酶接合。DNA连接酶不但在复制中起最后接合缺口的作用，在DNA修复、重组、剪接中也起缝合缺口作用。如果DNA两股都有单链缺口，只要缺口前后的碱基互补，连接酶也可连接，因此它也是基因工程的重要工具酶之一。

第2题：

DNA快速末端标记中使用的酶是什么酶？使用的常用同位素是什么？

正确答案: DNA快速末端标记中使用的酶：
a.Klenow片段（用于5’延伸端，大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶切割得到，有5’-3’聚合酶活性；3’-5’外切酶活性）；
b.T4DNA聚合酶（用于3’延伸端）。
DNA快速末端标记中使用的同位素：[α-³²P]dNTP。

第3题：

体内DNA复制与体外PCR反应不同的是

A、半保留复制

B、原料是dNTP

C、引发酶参与

D、双向复制

E、需DNA聚合酶

参考答案：C

第4题：

DNA体外进化过程包括什么？

正确答案: （1）通过随即突变或基因重组创造基因多样性，建立突变文库；（2）突变体在适当生物体内表达；（3）高通量筛选检出由一个氨基酸置换而引起的预期性状改善，精确选取阳性结果，供进一步进化；（4）此过程的不断循环直至获得预期性状的新型蛋白质。

第5题：

目的基因的获得是靠什么酶切开的DNA？（）

A、蛋白酶
B、唾液淀粉酶
C、内切酶
D、胰腺酶

正确答案:C

第6题：

cDNA文库是
A.在体外利用反转录酶成的与RNA互补的DNA B.在体内利用反转录酶合成的与RNA互补的DNA
C.在体外利用反转录酶成的与DNA互补的RNA D.在体内利用反转录酶合成的与DNA互补的RNA

答案：A

解析：

cDNA文库是以mRNA为模板，在体外利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA( cDNA)，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转人受体菌而获得的。

第7题：

需要连接酶的是（）。

A、DNA复制时
B、DNA损伤修复时
C、DNA的体外重组
D、RNA的转录

正确答案:A,B,C

第8题：

什么是改组?

答：对于严重违犯党纪、本身又不能纠正的党组织领导机构，应当予以改组。

第9题：

什么是酶的体外定向进化，原理及一般流程。

正确答案:酶的体外定向进化，又称实验分子进化，属于蛋白质的非合理设计，它不需事先了解酶的空间结构和催化机制，通过人为的创造特殊的条件，模拟自然进化机制（随机突变、重组和自然选择），在体外改造酶基因，并定向选择出所需性质的突变酶。
原理：在待进化酶基因的PCR扩增反应中，利用TaqDNA聚合酶不具有3’->5’校对功能的性质，配合适当条件，以很低的比率向目的基因中随机引入突变，构建突变库，凭借定向的选择方法，选出所需性质的优化酶（或蛋白质）。从而排除其他突变体。
流程：
1.因的选择：选择编码所需蛋白质的DNA序列
2.变或重组：通过易错PCR引入随即突变或DNAShuffling等方法增加基因序列的多样性。
3.变基因文库的构建：将获得的突变重组基因插入到表达载体中的构建突变库。
4.变体酶的表达：将载体转入受体细胞表达变异酶。
5.的基因鉴定：利用筛选和选择方法确定有益的特性克隆。
6.离改良基因并重复上述过程，直至获得所需性质的蛋白质。

第10题：

关于酶分子定向进化的基本方法叙述不正确的是（）

A、随机引物体外重组法需用DNA酶消化模板链产生随机大小片段
B、DNA重组技术可用超声波切割产生不同的DNA小片段
C、连续易错PCR方法中调整4种dNTP的浓度可提高突变率
D、相对于定点突变，筛选正向突变难度加大E交错延伸PCR主要特点是将PCR中的退火和延伸合二为一

正确答案:A

什么是酶的体外定向进化，什么是DNA改组（DNAshufflin

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