某市卫生局接到报告，2009年3月22日，某市报告22例甲型H1N1流感疑似病例。作为疾控中心工作人员，你被委派到病人隔离区采样。你认为采样应注意哪些问题？

参考答案：1．你认为采样应注意哪些问题？疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液等，以及急性期（病后1周内）和恢复期血清（病后3～4周）标本。实施气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液中，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上送至全国流感监测网络实验室或"传染病监测技术平台"项目相关网络实验室进行甲型H1N1流感病毒的病原学检测。不具备检测能力的省份，应按照生物安全的有关规定，尽快将标本送中国疾病预防控制中心病毒病所检测。2．标本的采集种类和要求(1)采集对象：所有甲型流感(H1N1)疑似病例应该采集上呼吸道标本来进行H1N1病毒的相关检测。(2)采集种类：鼻咽拭子／吸取物或者鼻腔冲洗液／吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液(VTM)，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上运送至实验室。3．采集可疑标本样品的操作过程、贮藏和运输过程中的注意要点(1)拭子：应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3ml病毒运输液。(2)采样管：外螺旋口、耐-70℃冻存。(3)采样液：含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液(可使用Hank或Eagle等培养液加入抗生素和0.5%BSA)。(4)临床标本储存：所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在- 70℃。如果没有-70℃冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。(5)临床标本运输：应按照A类包装要求进行样品的包装，所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。4．检测实验室工作人员生物安全防护个人防护装备要求。(1)呼吸防护装备--检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备。(2)鞋套。(3)前封式手术服。(4)双层手套。(5)眼部防护装备（护目镜或面罩）。5．检测实验室生物安全防护要求(1)采集疑似感染A(HINl)型猪流感病毒的患者临床标本、进行标本处理、包装、诊断性检测及进行病毒分离的工作人员必须进行严格的安全防护。(2)所有的涉及病例标本的实验操作（包括样本的处理、包装及包装拆除）必须在生物安全柜内进行。(3)临床标本的实验活动（病毒分离除外）必须在BSL-2实验室内进行。(4)病毒分离、鉴定必须在BSL-3实验室内进行。

参考答案：1．采样的对象、采样时间、采样种类要求(1)采集对象：禽流感病人，疑似病人，根据需要可采集人禽流感密切接触者。(2)采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清、粪便以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物、其他脏器。(3)采集标本时间1)咽、鼻拭子或含漱液、粪便在发病后头3天内采集。2)急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后2～4周采集。3)尸检标本尸检时采集。2．可疑标本采样时注意事项(1)病毒分离标本：应采集发病后3天内相关标本进行分离病毒。标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4～7.6的Hank液、Eagle液或水解乳蛋白液。在采样液中需加入抗生素，抗生素多用青、链霉素(1000U/ml)，庆大霉素(其终浓度为1mg/ml)和制霉菌素(终浓度为50μg/ml)。主要的采集样本的方法有以下几种：1)鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入4～5ml采样液中，尾部弃去。2)咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4～5ml采样液中，尾部弃去。3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取黏液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的黏液，并用采样液涮洗收集器3次。4)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1～1.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程数次。洗两侧鼻孔最多可用10～15ml洗液。5)漱口液：用10ml洗液漱口。漱口时让患者头部微后仰，发"噢"声，让洗液咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液。注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗生素有过敏史，如有则洗液和含漱液中不应含有抗生素。6)肺活检材料：肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000转/分离心10分钟，取上清液加入上述提到的抗生素。7)粪便标本：采集10～20g粪便（或用塑料杆人造纤维头的肛拭子2支）放入含有10mlPBS或生理盐水无菌的50ml有螺旋盖的塑料瓶内，密封，4℃环境下立即送至有关实验室。(2)血清标本：血清标本应包括急性期和恢复期双份血清5～10ml。急性期血样应尽早采集，一般不晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后2～4周采集。血液标本2000～2500转/分离心15分钟。收集血清，血清可在4℃存放1周，长期保存置﹣20℃。3．采集可疑标本样品的包装和运输过程中的注意要点(1)禽流感病例（包括疑似禽流感病例）标本必须放在大小适合的带螺旋盖且盖内有橡胶圈的塑料管里（一级容器），拧紧。(2)将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封；每袋装一份标本。(3)直接在一级容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。(4)同时也将标本有关信息填在禽流感人体标本送检表中，连同一级容器封于塑料袋内。(5)将装标本的密封袋放入二级带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器内，拧紧盖，在容器上标明有关信息。(6)将二级容器摆放在专用运输箱内（或疫苗运输箱），放入冰排，然后以柔软物质填充，并密封。1)同一患者2份以上的密封标本，可以放在同一个二级容器内。2)二级容器要承受不少于95kPa的压力，内衬具吸水和缓冲能力的物质。3)若进行病毒分离，可将密封好的装有标本的一级容器直接放入液氮运输罐内运输。4)所有容器必须印有危险生物标注。5)标本需由专人（2人）运送，不得邮寄，最好使用专车。(7)标本的运送：采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在﹣70℃以下保存。无﹣70℃条件的需在﹣20℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。

参考答案：1．采样应注意：疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液等，以及急性期（病后1周内）和恢复期（病后3～4周）血清标本。实施气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液中，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上送至全国流感监测网络实验室或"传染病监测技术平台"项目相关网络实验室进行甲型H1N1流感病毒的病原学检测。不具备检测能力的省份，应按照生物安全的有关规定，尽快将标本送中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所检测。2．标本的采集种类和要求临床标本的采集：(1)采集对象：所有甲型流感(H1N1)疑似病例均应采集上呼吸道标本进行H1N1病毒的相关检测。(2)采集种类：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔冲洗液/吸取物。如果不能收集这些标本，可合并鼻拭子与口咽拭子。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒运输液(VTM)中，并立即用冰块或冰排保存或置于4℃（冰箱），并马上运送至实验室检测。3．采集可疑标本样品的操作、贮藏和运输过程中的注意要点(1)拭子：应使用头部为合成纤维的拭子（如聚酯纤维），用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。不能用海藻酸钙做的拭子收集标本。标本采集管应包含3ml病毒运输液。(2)采样管：外螺旋口，耐﹣70℃冻存。(3)采样液：含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液（可使用Hank液或Eagle液等培养液加入抗生素和0.5%BSA）。(4)临床标本储存：所有呼吸道标本应保存在4℃，并尽快放置在﹣70℃。如果没有﹣70℃冰箱，标本应保存在4℃，但不应超过4天。(5)临床标本运输：应按照A类包装要求进行样品的包装，所有标本应标示清楚。疑似病例标本运送应包含的信息请参照禽流感标本运输。4．检测实验室工作人员生物安全防护个人防护装备要求(1)呼吸防护装备--检测合格的N95呼吸器或更高级别的防护装备；(2)鞋套；(3)前封式手术服；(4)双层手套；(5)眼部防护装备（护目镜或面罩）。5．检测实验室生物安全防护要求(1)采集疑似感染A(H1N1)型猪流感病毒的患者临床标本、进行标本处理、包装、诊断性检测及进行病毒分离的工作人员必须进行严格的安全防护。(2)所有的涉及病例标本的实验操作（包括样本的处理、包装及包装拆除）必须在生物安全柜内进行。(3)临床标本的实验活动（病毒分离除外）必须在BSL-2实验室内进行。(4)病毒分离、鉴定必须在BSL-3实验室内进行。

参考答案：1．咽拭子、洗漱液或痰液标本；血液标本；尿液标本；粪便标本。2．咽拭子、洗漱液或痰液标本(1)咽拭子的采集：让患者仰头张口，用压舌板压舌，用无菌棉拭子在咽部涂抹数次后，放入含2ml Hank液的试管中，棉拭子接触手的部分应及时折断或剪断去掉，然后盖紧试管。(2)洗漱液的采集：用生理盐水或自配淡盐水约15ml作为洗漱液，让患者咳嗽后，倒入灭菌生理盐水或自配淡盐水约15ml，反复洗漱咽部1分钟，直接将洗漱液吐入灭菌容器内。(3)痰液标本：肺部感染应采取痰标本，以清晨第一口痰为最佳。采取标本的时间一般在发病的第一日采集，最迟不得超过3日，最好选择体温在38℃以上时采集。3．血液标本 作血液病原培养时，严格无菌采静脉血，一般成人采血10～15 ml，儿童2～5ml，婴儿0.5～2ml，放入无菌的加入抗凝剂的有螺口容器或培养瓶中送检。作血片、暗视野检查可采耳垂血或指尖血。4．尿液标 本主要采用中段尿采集法，先用肥皂水清洗外阴部，再以无菌水洗净，一般取首次晨尿的中段尿10～20ml于无菌容器内。结核分枝杆菌集菌检查时，以一清洁容器留取24小时尿，取沉渣10～15ml送检。注意无菌操作并在用药前采集，最好在2～3小时内送到实验室检测，否则应在4～8℃条件下保存运送样品。5．粪便标本 对黏液脓血便应挑取黏液或脓血部分，液状粪便采集水样便或含絮状物的液状粪便2～5ml;成形粪便至少取蚕豆大小粪便1块(约5g)放于灭菌容器内，最好加有保存液或增菌液。若无法获得粪便时，可用保存液或增菌液湿润过的棉拭子插入肛门4～5cm深处(小儿2～3cm)轻轻转动一圈，取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检，为保证多个检验项目的开展，同一患者应至少采集2支肛拭。采样时注意勿将尿液或水混入粪便或容器内，采样后尽快塞紧或旋紧容器，所采取的粪便标本应尽快送检，运送时间不得超过2小时，否则应保存在4～8℃条件下送检；集体腹泻或食源性疾病暴发患者粪便采集，应根据患者人数决定采取标本的数量；尽量在急性腹泻期及用药前采集。