Sanger法测序的基本原理是什么？

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Sanger法测序的基本原理是什么？

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第1题：

目前自动化测序的基本原理是基于

A、链末端终止法

B、化学降解法

C、生物质谱法

D、杂交测序法

E、全新的测序原理

参考答案：A

第2题：

简述PCR循环测序的基本原理。

本题答案：PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式;
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。

第3题：

Sanger法测序的待测模板包括

A、单链DNA

B、双链DNA

C、单链RNA

D、双链RNA

E、任意核酸

参考答案：AB

第4题：

SANGER双脱氧链终止法的原理是什么？

正确答案: DNA链中核苷酸以3’，5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是2’-脱氧核苷三磷酸。2’，3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。

第5题：

Sanger建立的DNA测序技术是（）。

A、合成终止法
B、化学断裂法
C、杂交法
D、PCR法
E、基因芯片法

正确答案:A

第6题：

DNA测序技术中的链末端终止法又称为

A、经典法

B、传统法

C、酶法

D、Sanger法

E、自显影法

参考答案：CD

第7题：

Sanger双脱氧终止法对DNA测序时,下列哪种核苷酸的加入会使DNA链延长终止()

A、dGTP

B、dTTP

C、dCTP

D、Datp

参考答案：C

第8题：

Sanger法的测序体系包括

A、待测模板

B、测序引物

C、RNA聚合酶

D、标记的dNTP

E、凝胶电泳

参考答案：ABDE

第9题：

何谓基因？简述基因测序的基本原理及其在基因诊断中的应用价值？

正确答案:（1）基因是指能够为生物大分子（主要是蛋白质，还有tRNA、rRNA等核酸）编码的DNA片段。基因不仅可以通过复制把遗传信息传递给下一代，还可以使遗传信息得到表达。不同人种之间头发、肤色、眼睛、鼻子等有所不同，是基因差异所致。从这个意义上讲，基因就是能够表达一定基因产物的DNA序列。
（2）DNA的序列分析即核酸一级结构的测定，是现代分子生物学中一项重要技术，也是基因诊断的第一手资料。传统的测序方法多采用放射性核素标记，手工进行DNA复制或裂解反应、凝胶电泳分离DNA片段，放射自显影以及人工判断核苷酸序列等程序来测定DNA序列。这无疑是费时的、准确性较差的方法。近年来发展起来的自动测序使DNA序列分析工作标准化、规范化、工厂化，极大地促进了DNA结构的研究。新型DNA自动测序仪，采用荧光染料标记技术及毛细管电泳方法进行测定，配合同步激光扫描读序，测定反应、灌胶、进样、电泳、扫描检测、数据分析全部实现了计算机程序控制的自动化，加快了检测速度，大大提高了测定的精确性。

第10题：

全基因组鸟枪法测序的基本原理是什么？

正确答案:鸟枪测序法基本原理：大分子DNA被随机地“敲碎”成许多小片段，收集这些随机小片段并将它们全部连接到合适的测序载体；小片段测序完成后，根据重叠区计算机将小片段整合出大分子DNA序列。这就是所谓的鸟枪测序法。

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