说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。

题目

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第1题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物－PCR方法(general primermediated PCR，CJP－PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nestcd primers－polymerasc chain reaction，NP－PCR)

D、AP－PCR方法(arbitrarily primcd PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第2题：

简述PCR循环测序的基本原理。

本题答案：PCR技术能够快速、特异性地扩增靶DNA，应用PCR技术测定DNA序列分为两个步骤：先利用PCR扩增靶序列片段，制备测序模板，然后再利用PCR直接测定序列。PCR测序采用了热循环高效合成DNA的特性并结合双脱氧核苷酸终止法，使引物链终止的延伸产物数量在热循环过程中得到增加，因此称为循环测序。
每个测序循环包括：
①PCR扩增制备的模板DNA变性成单链形式;
②标记引物与其中的一条链上的互补序列退火;
③退火后的引物在耐热DNA聚合酶催化下发生链延伸终止反应。
本次循环产生的模板链与延伸终止链形成的双链的产物，在下一轮测序循环中，再次被变性，释放出模板链，作为又一轮引发反应的模板，同时积累下一轮循环产生的链终止产物。
上述循环步骤重复20~40次，使链终止产物以线性方式获得扩增。

第3题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用的PCR技术是

A、通用引物-PCR方法(general primer-media-ted PCR，GP-PCR)

B、多重PCR(multiplex PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)

D、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第4题：

在固定容积的PCR反应体系中，加入越多的模版，PCR反应的效果就会越好。（）

正确答案:错误

第5题：

下列关于组成PCR反应体系的基本成分的叙述中不正确的是( )

A.模板DNA
B.特异性引物
C.

D.四种dNTP

答案：C

解析：

第6题：

简述标准的PCR反应体系。

参考答案：

第7题：

简述PCR基本原理。

本题答案：PCR技术是模拟生物体内DNA的半保留复制，在体外合成DNA链的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的条件下经过：
“高温变性→低温退火→中温延伸”三步循环，获得大量扩增片段。

第8题：

对于极微量的靶序列的扩增可以采用下列哪种PCR技术？( )

A、AP-PCR方法(arbitrarily primed PCR)

B、通用引物-PCR方法(general primer-mediated PCR，GP-PCR)

C、套式PCR(nested primers-polymerase chainreaction，NP-PCR)

D、多重PCR(multiplex PCR)

E、原位PCR技术(in situ PCR，ISPCR)

参考答案：C

第9题：

PCR聚合酶链式反应体系的基本成分由耐热的DNA聚合酶、引物、 dNTP、 Mg2+、缓冲液、模板组成。

正确答案:正确

第10题：

简述PCR原理及其基本反应步骤。

正确答案:PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板互补的DNA链。

说明PCR的基本原理、PCR体系的基本组成及其作用。

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