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提高PCR反应的特异性一般可以使用哪几种方法？

题目

提高PCR反应的特异性一般可以使用哪几种方法？

参考答案和解析
正确答案: A.引物设计：引物长度、碱基配对是否严格、GC%含量、退火温度、引物浓度与纯度、稳定性、是否为简并性引物等；
B.使用热启动：在变性完成之后再加入DNA聚合酶（或聚合酶才有活性），这样可以提高特异性，因为DNA聚合酶在低温时也有活性，可能引起非特异的扩增；
C.镁离子浓度：不同的模板和引物有不同的镁离子浓度，应进行预实验进行探索；较高的镁离子浓度会提高产量，同时降低特异性；dNTP浓度较高时应适当提高镁离子浓度；
D.促进PCR的添加剂：降低DNA熔解温度，从而有助于引物退火并辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区，可提高特异性和产率；
E.使用巢式PCR：降低扩增多个靶位点的可能性，提高特异性。
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第1题：

PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外

A、缩短反应时间

B、提高工作效率

C、消除位置的边缘效应

D、缩短非特异性反应时间

E、提高反应特异性


参考答案：C

第2题：

PCR引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃,影响产物的生成。


正确答案:正确

第3题：

关于PCR技术的扩展，下列叙述错误的是

A、多重PCR是在一次反应中加入多种引物，同时扩增一份DNA样品中的不同序列

B、筑巢法PCR可以大大提高PCR的效率，但PCR特异性降低

C、利用反向PCR，可以扩增已知序列区间以外的序列

D、利用不对称PCR，可以获得大量单链DNA

E、共享引物PCR是利用3条引物来扩增两种不同的DNA序列，这种PCR常用于细菌学鉴定，确定同一种细菌的不同种类


参考答案：B

第4题：

对于一般的培训活动，需求的预测可以采用哪几种方法？


正确答案: ①业务分析；
②组织分析；
③工作分析；
④调查分析；
⑤绩效考评；
⑥评价中心。

第5题：

实时荧光定量PCR的优点包括（）。

  • A、实时监控PCR反应的进程
  • B、特异性高于普通PCR
  • C、灵敏度高
  • D、在单管中实现扩增和检测分析

正确答案:A,B,C,D

第6题：

以下关于梅毒螺旋体核酸检测－聚合酶链反应(PCR)的认识,错误的是()。

A、PCR检测TP DNA，特异性很强，敏感性很高

B、当前诊断梅毒的PCR仍存在引物的非特异性、对血清(全血)、CSF等敏感度低

C、PCR检测可作为判愈检测

D、PCR方法易受标本中的组织和细胞碎片等物质抑制

E、当皮损开始愈合分泌物减少，血清学试验阳性反应时，采用PCR方法不合适


正确答案：C

第7题：

PCR反应的特异性与（）直接相关。

  • A、模版的质量
  • B、DNA聚合酶的质量
  • C、引物的特异性
  • D、退火温度

正确答案:A,B,C,D

第8题：

抗原抗体反应必须有电解质参与，当电解质超出最佳反应浓度时，可以

A、提高反应的敏感性

B、降低反应的敏感性

C、抗原抗体不发生反应

D、降低反应的特异性

E、提高反应的特异性


参考答案：A

第9题：

提高PCR特异性的方法包括（）。

  • A、增强引物特异性
  • B、提高退火温度
  • C、提高模版质量
  • D、使用热启动聚合酶

正确答案:A,B,C,D

第10题：

使用ERASE命令删除的实体能否被恢复，如果可以，有哪几种方法？


正确答案: 使用删除命令删除的实体能被恢复，主要有以下几种方法：
1、使用UNDO命令来恢复
2、可以使用编辑→撤消来进行恢复
3、Ctrl+Z

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