简述酶促切割错配检测基因突变的原理及其优、缺点。

题目

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第1题：

列举常用5种不同基因诊断技术，简述其原理及优、缺点。

正确答案: 核酸分子杂交：错配时杂交信号减弱或消失，可用于基因结构和表达检测，须制备合适的探针。
PCR：变异引起扩增产物不同，灵敏度高，须选择合适引物，有假阴性或假阳性结果。
SSCP：突变引起核酸二级结构改变，可检测已知或未知突变，检测的灵敏度被片段长度稀释。
RFLP：基因变异改变酶切图谱，须选择合适的限制性核酸内切酶；当变异没有引起任何酶切结果的改变时，则无法使用。
DNA序列测定：直接检测核酸序列比较差异，最准确的一种诊断方法。
基因芯片：多元杂交分析杂交差异，一次杂交可检测一个样品的多个基因不同突变或表达变化。

第2题：

简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。

正确答案: M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。

第3题：

简述混合动力汽车的工作原理及其优缺点。

正确答案: 混合动力电动汽车是指利用电机和内燃机两种动力驱动的汽车。其优点是：
1.采用混合动力后可按平均需用的功率来确定内燃机的最大功率，使内燃机处于油耗低、污染少的最优工况下工作。需要大功率时，由电池来补充。负荷小时，内燃机富余的功率可发电给电池充电。由于内燃机可持续工作，电池又可以不断得到充电，故其行程和普通汽车一样。
2.因为有了电池，可以十分方便地回收制动时、下坡时、怠速时的能量。
3.在繁华市区，可关停内燃机，由电池单独驱动，实现零排放。
4.有了内燃机可以十分方便地解决耗能大的空调、取暖、除霜等纯电动汽车遇到的难题。
5.可以利用现有的加油站加油，不必再投资。
6.可让电池保持在良好的工作状态，不发生过充、过放，延长其使用寿命，降低成本。
缺点：有两套动力，再加上两套动力的管理控制系统，结构复杂，技术难度高，价格贵。

第4题：

简述真空冷冻干燥的基本原理及其优缺点？

正确答案: 1、利用天然和人工低温，使物料组织中水分冻结后再解冻从组织中流出，达到脱水的目的。缺点：制品中的水溶性物质和水分一起流失，制品成为多孔性物质
2、真空冷冻干燥法：是将材料冻结后，先冷却到冻结温度以下，再在低温和真空条件下使材料中冻结成冰的水分直接蒸发成水汽（升华），并冷凝除水的食品干燥方法

第5题：

简述空调水系统中的同程式及其主要优、缺点。

正确答案: 同程式系统的供水，回水干管中的水流方向相同，经过每一环路的管路长度相等。
优点：水量分配、调节方便、便于水力平衡。
缺点：需设回程管，管道长度增加初投资稍高。

第6题：

简述化学切割错配检测基因突变的基本原理及其优、缺点。

正确答案: 化学切割错配（chemical cleavage of mismatch，CCM）通过在DNA：DNA或DNA：RNA异源杂合双链核酸分子中发生C错配（如A-C、T-C、C-C配对）处，能被羟胺和哌啶切割，如系T错配，能被四氧化锇切割的特点，先将野生型探针与待检样品杂交，再分别用羟胺、哌啶和四氧化锇处理；根据凝胶电泳中DNA片段数量和大小判断样品中有无突变、突变位置及类型等。
优点：准确率高，无非特异性切割，检出率高，达100%，结合荧光检测系统还可提高其灵敏度达1突变/10个细胞，可用于长达2kb片段。
缺点：步骤多，费时，使用有毒化学物质。

第7题：

简述酶法检测血清中TCHO的原理。

正确答案: TC在CHE的作用下水解成FC和FFA，FC再经过CHOD氧化成△4胆甾烯酮和H₂O₂，再分别定量O₂的消耗或者H₂O₂的生成量，或是△4胆甾烯酮的生成量，作为定量的依据。

第8题：

简述M-FISH的原理及其优缺点。

正确答案: 混合数种荧光原色，形成不同颜色荧光探针，在一次杂交中使每一条染色体都涂上不同的颜色，可同时观察全部染色体（见图9－36）。利用这种技术可以很容易看到多条染色体间的复杂易位情况和确定标识染色体的来源。对于不知来源的基因片段及复杂的基因重组，特别是肿瘤染色体很有帮助。缺点是分辨率不够，细微的缺失可能无法判断；另外接近中心体着丝粒附近的染色质，因不易结合，也不容易判断；同时M-FISH对同一条染色体中的易位或倒位也无法判断，并且它也不能精确地显示染色体断裂的区带。

第9题：

简述优/缺点平衡表的优缺点。

正确答案: 优点：可以使自己对自己有更深刻的认识；
缺点：它不能提供一个人的全部优点和缺点，而且填表时还需要一定的时间。

第10题：

简述酶溶法破细胞的原理、优缺点是什么？

正确答案: 机理：就是利用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。
优点：
一定的选择性；
细胞外形完整，核酸释放少，有利于进一步分离过程。
缺点：（只能用于实验室）
产物抑制造成效率低下；
溶酶价格高；
通用性差，不易确定最佳条件。

简述酶促切割错配检测基因突变的原理及其优、缺点。

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