问答题简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。

题目

问答题

简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。

参考答案和解析

正确答案：核糖核酸酶切分析（RNase cleavage）的基本原理是在一定条件下，异源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被核糖核酸酶RNase识别并切割；利用含SP6或T7噬菌体启动子的质粒，在体外合成与野生型DNA或RNA互补的标记RNA探针，将其与待检核酸样品杂交后再用RNase处理，形成的异源双链核酸分子如有单碱基错配，会被RNase识别切割，通过分析酶切片段数量及大小可检出有无突变及点突变位置。
优点：一步反应确定突变在片段中的位置，不使用有害化学试剂。
缺点：突变检出率不高，因为错配为嘌呤碱基时RNase的切割效率低下，即使同时检测正、反义两条链，检出率也只能达到70%，且需要制备特异性RNA探针。

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相似问题和答案

第1题：

论述投射测验的概念及其优、缺点。

正确答案:（1）投射测验的概念
投射最早出现于弗洛伊德的心理学理论投射技术一词由富兰克（L.Frank）于1939年首先明确提出。投射测验（projection test）要求被试对一些模棱两可或模糊不清、结构不明确的刺激作出描述或反应，通过对这些反应的分析来推断被试的内在心理特点。其逻辑假定是，人们对外在事物的看法实际上反映出其内在的真实状态或特征。例如，设计一幅没有任何含义、模糊不清的墨迹图，要求被试看了墨迹图之后展开联想，回答主试提出的问题。
（2）投射测验的优点
非结构性。这是指投射测验使用非结构化任务作为测验材料，即允许被试产生各种各样不受限制的反应。为了促使被试充分想象，投射测验一般只有简短的指示语，测验材料也是含义模糊、模棱两可。由于测验材料的模糊性，被试的反应较少受到情境线索和他人观点的影响，往往会表现出被试的真实的内在感受、需要、个性、情绪、动机、冲突、防御等心理内容。采用投射法可以测试出被试人格的更真实的面貌。
掩蔽性。这是指测验的目的的隐蔽性，被试一般不可能知道测验的真实目的，也不知道对自己的反应将作何种心理学解释，减少了被试伪装自己的可能性。通过投射技术可以使被试不愿表现的个性特征、内在冲突和态度更容易地表达出来，因而在对人格结构、内容的深度分析上有独特的功能。投射技术在临床领域有一定的应用前景。
整体性。这是指测验关注的是对人的总体评估，而不是针对单个特质的测量。被试的任何反应都可能影响评估结论，在对投射测验进行解释时要注意它的整体性特征。
（3）投射测验的缺点
由于投射测验结果的分析一般是凭分析者的经验的主观推断，其科学性有待进一步考察。
投射测验在计分和解释上相对缺乏客观标准，人为性较强，不同的测验者对同一测验结果的解释往往不同，并且，投射测验的重测信度也很低。
投射技术是否能真正避免防御反应的干扰，在研究上并未得出一致结论。
投射测验一般为个体测验，不仅测验时间长，分析结果所需要的时间也很长，实施起来耗费精力。
投射测验对主试和评分者的要求很高，一般只能由经验丰富、有专业背景的人担当。这种局限使一般的人事管理人员无法直接应用投射测验，测验的传播受到影响。
对投射测验结果的评价带有浓重的主观色彩，不能满足人事测验的公平性原则。

第2题：

列举常用5种不同基因诊断技术，简述其原理及优、缺点。

正确答案: 核酸分子杂交：错配时杂交信号减弱或消失，可用于基因结构和表达检测，须制备合适的探针。
PCR：变异引起扩增产物不同，灵敏度高，须选择合适引物，有假阴性或假阳性结果。
SSCP：突变引起核酸二级结构改变，可检测已知或未知突变，检测的灵敏度被片段长度稀释。
RFLP：基因变异改变酶切图谱，须选择合适的限制性核酸内切酶；当变异没有引起任何酶切结果的改变时，则无法使用。
DNA序列测定：直接检测核酸序列比较差异，最准确的一种诊断方法。
基因芯片：多元杂交分析杂交差异，一次杂交可检测一个样品的多个基因不同突变或表达变化。

第3题：

简述集体决策的优、缺点。

答案：

解析：

集体决策的优点是：①决策能较好地保证决策结果的合理性和正确性；②集体决策具有较好的执行性；③集体决策更富于创造性。集体决策的缺点是：①决策时间较长；②决策无明确的负责人，容易造成无人对决策后果负责的局面。

第4题：

简述空调水系统中的同程式及其主要优、缺点。

正确答案: 同程式系统的供水，回水干管中的水流方向相同，经过每一环路的管路长度相等。
优点：水量分配、调节方便、便于水力平衡。
缺点：需设回程管，管道长度增加初投资稍高。

第5题：

简述mRNA差异显示筛选差异表达基因的基本原理及其优、缺点。

正确答案: M.RNA差异显示技术基于逆转录PCR（RT-PCR）而建立：抽提配对样品如正常和疾病细胞内mRNA（或总RNA），分别逆转录成为cDNA，然后行PCR随机扩增；一条引物为oligo（dA），能与单链cDNA5’端oligo（dT）结合，另一条为随机引物，能与3’端互补核苷酸序列结合，因此经过RT-PCR扩增后，能将mRNA逆转录为cDNA、扩增获得双链cDNA及其不同PCR产物；扩增产物经过凝胶电泳分析，比较组间扩增产物异同，回收差异片段为探针在cDNA文库或基因组文库中筛选相关基因，从而确定这些基因在疾病过程中的参与情况。
优点：简单易行；灵敏度高；重复性好；多能性；快速。
缺点：假阳性率高，达70%以上；逆转录产物仅为mRNA3’非翻译区，需要进一步的文库筛选确定有关基因。

第6题：

简述热风干燥的基本原理及其优缺点？

正确答案: 热风干燥工作原理：风机将空气送入加热器被加热，然后进入干燥室，一方面热空气为物料提供能量使其升高温度，加速水分蒸发，另一方面将物料周围的水蒸气带走，使物料被干燥。优点：不受气候限制，可防止干燥过程中细菌腐败，减轻脂质氧化，制品色泽较好。缺点：温度过高对产品品质的影响

第7题：

简述化学切割错配检测基因突变的基本原理及其优、缺点。

正确答案: 化学切割错配（chemical cleavage of mismatch，CCM）通过在DNA：DNA或DNA：RNA异源杂合双链核酸分子中发生C错配（如A-C、T-C、C-C配对）处，能被羟胺和哌啶切割，如系T错配，能被四氧化锇切割的特点，先将野生型探针与待检样品杂交，再分别用羟胺、哌啶和四氧化锇处理；根据凝胶电泳中DNA片段数量和大小判断样品中有无突变、突变位置及类型等。
优点：准确率高，无非特异性切割，检出率高，达100%，结合荧光检测系统还可提高其灵敏度达1突变/10个细胞，可用于长达2kb片段。
缺点：步骤多，费时，使用有毒化学物质。

第8题：

简述White和Anfinsen进行的牛胰核糖核酸酶（Rnase）变性和复性的经典实验。

正确答案: 螺旋中一个残基的C=O与其后第四个氨基酸残基的N-H之间形成氢键。形成的氢键C=O…H-N几乎成一直线。每个氢键的键能虽不强，但是大量的氢键足以维持α-螺旋的稳定性。一圈螺旋3.6个残基，氢键封闭13个原子。α-螺旋是α-系螺旋的一种，α-系螺旋可用下列通式表示：
⑴圈内原子数为3n+4，当n=3时，即为α-螺旋。
⑵由于α-螺旋内原子数为13，从而α-螺旋也写作：3.613。当n=2时，即为3.010螺旋。此螺旋构象不如3.613构象稳定。

第9题：

简述速率散射比浊分析的基本原理及其优点。

正确答案: 速率散射比浊分析是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的速度（不是免疫复合物积累的量），连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，即动态的速率散射比浊法。
抗原与抗体混合后的瞬间便引发反应，在抗体过量的前提下，抗原抗体反应速度由慢到快，单位时间内形成的免疫复合物不断增多，随后逐渐减慢，连续动态监测此过程，可发现在某一单位时间内抗原抗体反应速度最快、免疫复合物形成量最多、散射光强度最大，即为所谓的速率峰。
速率散射比浊分析，测定的是抗原抗体反应的第一阶段，其优点是：快速、灵敏、可检测微量样本，由于该方法基本不受本底散射信号的干扰，检测的精密度大大提高。

第10题：

简述承租企业对租赁机构的选优的必要性及其分析。

正确答案: （1）承租企业对租赁机构优选的必要性如下：
①可以降低租赁成本；
②可以减少利息支出；
③能够保证成交合同的质量。
（2）承租企业对租赁机构的优选分析：
①租赁机构的信用度。租赁机构的信用度标志着承租人所要承担的租赁机构违约所造成的风险的大小，信用度是以租赁机构过去经营业绩等的综合的舆论评价，能较为准确地反映租赁机构的经营态度和业务水平。其信用度的高低会直接影响到企业的租赁成本和收益率。因此应选择信用度高的租赁机构。
②租赁机构的经济实力。实力雄厚的租赁机构多以金融机构或财团为依靠，容易取得较低的贷款利率，争取到较多的税收优惠等待遇。所以承租人在选择租赁机构时，对租赁机构的经营实力不容忽视。
③租赁合同的质量。租赁合同的条款必须完整并作出明确的规定；同时合同质量还应包括避免或减少由于租赁机构的原因而带来的违约风险这一内容。
④租赁费用的收取标准和收取方法。因为租赁费用的收取标准和收取方法关系到租赁成本的高低、利率的大小、租金缴纳的次数及手续费的多少等，因此应予以充分的考虑。

简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。

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