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简述点突变技术的主要技术过程及其在酶分子修饰中的作用。

题目
问答题
简述点突变技术的主要技术过程及其在酶分子修饰中的作用。
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第1题：

简述核糖核酸酶切技术分析基因突变的基本原理及其优、缺点。


正确答案: 核糖核酸酶切分析（RNase cleavage）的基本原理是在一定条件下，异源双链核酸分子RNA：RNA或RNA：DNA中的错配碱基可被核糖核酸酶RNase识别并切割；利用含SP6或T7噬菌体启动子的质粒，在体外合成与野生型DNA或RNA互补的标记RNA探针，将其与待检核酸样品杂交后再用RNase处理，形成的异源双链核酸分子如有单碱基错配，会被RNase识别切割，通过分析酶切片段数量及大小可检出有无突变及点突变位置。
优点：一步反应确定突变在片段中的位置，不使用有害化学试剂。
缺点：突变检出率不高，因为错配为嘌呤碱基时RNase的切割效率低下，即使同时检测正、反义两条链，检出率也只能达到70%，且需要制备特异性RNA探针。

第2题：

定点突变技术在酶分子修饰中有什么作用？简述其主要技术过程。


正确答案:作用：通过定点突变技术或是化学方法，将酶蛋白分子中的某个氨基酸残基置换为另一个氨基酸残基，观察其对酶催化反应的影响和变化，分析了解该氨基酸残基在酶催化过程中的作用。
技术过程：
A、基因序列分析
B、蛋白质结构分析
C、酶活性中心分析
D、引物设计进行基因定点突变
E、酶基因克隆表达
F、变异特性分析

第3题：

简述酶分子侧链上的修饰功能基团主要有哪些？


正确答案:酶的化学修饰主要是对一些活泼性比较强的氨基酸侧链基团进行修饰。主要包括：氨基（赖氨酸残基）、羧基（谷氨酸、天冬氨酸残基）、羟基（丝氨酸、苏氨酸残基）、巯基（半胱氨酸残基）、咪唑基（组氨酸残基）、胍基（精氨酸残基）、酚基（酪氨酸残基）、吲哚基（色氨酸残基）、甲硫基（蛋氨酸残基）。

第4题：

简述酶分子组成单位修饰的作用。


正确答案:酶分子组成单位修饰的作用：
①提高酶的催化效率；
②增强酶的稳定性；
③改变酶的专一性；
④获得各种核酸类酶。

第5题：

简述定点突变技术的主要技术过程及其在酶分子修饰中的应用。


正确答案:定点突变是20世纪80年代发展起来的一种基因操作技术，是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。定点突变技术是氨基酸置换修饰和核苷酸置换修饰的常用方法，也是蛋白质工程的常用技术。
（1）主要过程：
1.新的酶分子结构的设计；
2.突变基因碱基序列的确定；
3.突变基因的获得；
4.新酶的获得。
（2）应用：
1.酪氨酰-tRNA合成酶的修饰是将第51位的苏氨酸由脯氨酸置换，苏氨酸的密码子是ACU、ACC、ACA、ACG，脯氨酸的密码子是CUU、CCC、CCA、CCG，在mRNA上只需将密码子上的第一个A换成C，在对应的基因上只需将T换成G即可达到置换的目的。
2.T4溶菌酶的修饰是将第3位以异亮氨酸（密码子为AUU、AUC、AUA，对应基因上的碱基次序为TAA、TAG、TAT）置换成半胱氨酸（密码子为UGU、UGC，对应基因上的碱基次序为ACA、ACG），只需在对应基因的位点上置换两个碱基，由AC置换TA即可。

第6题：

何谓易错PCR技术？简述易错PCR技术进行体外基因突变的主要过程


正确答案:指从酶的单一基因出发，在改变反应条件的情况下进行PCR，使扩增得到的基因出现碱基配对错误，从而引起基因突变的技术过程。
过程：双链DNA的变性、引物与单链DNA退火结合、引物延伸。

第7题：

定点突变技术在酶分子修饰中有何应用？


正确答案:定义：指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。是蛋白质工程和酶分子组成单位置换修饰中常用的技术。应用：新的酶分子结构的设计；突变基因碱基序列的确定；突变基因的获得；新酶的获得。

第8题：

酶分子修饰技术不断发展，主要的修饰方法有哪些？


正确答案: 酶分子修饰技术不断发展，修饰方法多种多样。主要的有：
①金属离子置换修饰；
②大分子结合修饰；
③肽链有限水解修饰；
④酶蛋白侧链基团修饰；
⑤氨基酸置换修饰；
⑥物理修饰。

第9题：

简述点突变技术的主要技术过程及其在酶分子修饰中的作用。


正确答案:新的酶分子结构的设计、突变基因碱基序列的确定、突变基因的获得、新酶的获得。

第10题：

酶分子化学修饰的定义及其作用。


正确答案:定义：在意外将酶分子通过人工的方法与一些化学集团，进行共价链接，从而改变酶的结构和性质的技术。
作用：
1.善酶制剂的性能（主要是稳定性和免疫原性，也可赋予酶性功能）
2.明酶的结构。

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