简述质粒DNA的分离提取方法。

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简述质粒DNA的分离提取方法。

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第1题：

常采用质粒DNA小量提取的方法是 ( )

A、碱裂解法

B、SDS裂解法

C、煮沸裂解法

D、酚抽提法

E、牙签少量制备法

参考答案：A

第2题：

在碱裂解法提取质粒时，用于沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.75%乙醇

D.异丙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第3题：

在碱裂解法提取质粒时，沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.异丙醇

D.75%乙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第4题：

从细菌中分离质粒DNA的方法都包括的基本步骤是（）。

A、培养细菌检测质粒
B、培养细菌使质粒扩增
C、收集和裂解细胞
D、分离和纯化质粒DNA
E、B+C+D

正确答案:E

第5题：

目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）

A、牙签少量制备法
B、小量一步提取法
C、SDS裂解法
D、碱裂解法
E、煮沸裂解法

正确答案:D

第6题：

关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确 ( )

A、溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体

B、溶液Ⅱ的作用是使DNA变性

C、溶液Ⅲ的作用是使DNA复性

D、质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性

E、该方法简单，重复性好，在实验中经常使用

参考答案：A

第7题：

简述质粒的DNA特性。

答案：

解析：

(1)质粒的复制:质粒DNA在细菌中的复制有两种,一种是严紧型质粒的复制,它们的复制与细菌的繁殖密切相关;另一种是松弛型质粒复制,能在没有蛋白质合成的情况下继续复制。(3分)(2)质粒的不相容性:是指细菌质粒不能在相同细胞中同时存在的现象。(3分)(3)质粒的转移性:在自然条件下,许多质粒都可通过细菌结合的作用,将质粒复制子转移到新的宿主菌内。(2分)(4)质粒中的选择性标记:常用的选择性标记是抗生素抗性基因。(2分)

第8题：

常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括

A、α互补筛选

B、插入失活筛选

C、杂交筛选

D、质粒的小量快速提取

E、DNA序列测定筛选

参考答案：D

第9题：

试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

正确答案: 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
S.DS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。

第10题：

简述脂肪酸的提取分离方法。

正确答案: （1）提取：有机溶剂提取和超临界二氧化碳流体萃取法。
（2）分离：
①蒸馏法，实际工作中可分为减压蒸馏和分子蒸馏两类方法。
②丙酮冷冻法。
③脂肪酸盐结晶法，将脂肪酸混合物经氢氧化钠皂化为脂肪酸盐，冷却，析晶。
④尿素结晶法，利用尿素能与脂肪族化合物形成加合物，可将多不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸分离。

简述质粒DNA的分离提取方法。

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