碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

题目

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第1题：

在碱裂解法提取质粒时，用于沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.75%乙醇

D.异丙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第2题：

目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）

A、牙签少量制备法
B、小量一步提取法
C、SDS裂解法
D、碱裂解法
E、煮沸裂解法

正确答案:D

第3题：

在碱裂解法提取质粒时，沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.异丙醇

D.75%乙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第4题：

传统的时间序列分析法，把影响市场现象变动的各种因素，按其特点和综合影响结果分为四种类型，即（）、（）、（）、（）。

正确答案:长期变动趋势；季节变动；循环变动；不规则变动

第5题：

分析可能影响正常排便的各种因素。

正确答案: (1)心理因素：精神抑郁时，身体活动减少，肠蠕动减少导致便秘；而情绪紧张、焦虑可导致迷走神经兴奋，肠蠕动增加而致吸收不良，引起腹泻。(2)社会文化因素：当个体因排便问题需要医务人员帮助而丧失隐私时，个体就可能压抑排便的需要而造成排便功能异常。(3)年龄：2～3岁以下的婴幼儿，神经肌肉系统发育不全，不能控制排便；老年人随年龄增加，腹壁肌肉张力下降，胃肠蠕动减慢，肛门括约肌松弛等导致肠道控制能力下降而出现排便功能的异常。(4)食物与液体摄入：富含纤维的食物可提供必要的粪便容积，加速食糜通过肠道，减少水分在大肠内的再吸收，使大便柔软而能轻易排出。每日摄入足量液体，可以液化肠内容物使食物能顺利通过肠道。当摄食量过少、食物中缺少纤维或水分不足时，无法产生足够的粪便容积和液化食糜，食糜通过回肠速度减慢、时间延长，水分的再吸收增加，导致粪便变硬、排便减少而发生便秘。(5)活动：活动可维持肌肉的张力，刺激肠道蠕动，有助于维持正常的排便功能。(6)排泄习惯：在日常生活中，许多人都有自己固定的排便时间，使用某种固定的便具，排便时从事某些活动如阅读等，当这些生活习惯由于环境的改变无法维持时，就可能影响正常排便。(7)疾病：肠道本身的疾病或身体其他系统的病变均可影响正常排便。(8)药物：如缓泻药可刺激肠蠕动，减少肠道水分吸收，促使排便；麻醉剂或止痛药，可使肠运动能力减弱而导致便秘。(9)治疗和检查：因为肠壁肌肉的暂时麻痹或伤口疼痛而造成排便困难；胃肠X线检查常需灌肠或服用钡剂，也可影响排便。

第6题：

在SH/T0248冷滤点试验中，分析可能导致测量结果不准的影响因素？

正确答案: （1）温度计未经校准，或虽经校准但未使用修正值；
（2）试验前试样未升温到30±5℃；
（3）试样未过滤；
（4）抽滤压力不符合标准要求；
（5）冷浴温度设置不合理或实际温度与设置温度不符、套管的使用不合理；
（6）滤网孔径不标准。

第7题：

试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

正确答案: 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
S.DS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。

第8题：

常采用质粒DNA小量提取的方法是 ( )

A、碱裂解法

B、SDS裂解法

C、煮沸裂解法

D、酚抽提法

E、牙签少量制备法

参考答案：A

第9题：

方差分析是根据试验的结果进行分析，以鉴别各个有关因素对试验结果的影响程度。

正确答案:正确

第10题：

碱裂解法制备质粒DNA的方法有哪些？

正确答案: （1）接种菌落于含抗生素的LB中，37℃剧烈振荡反应；
（2）培养液4℃12000rpm30min离心；
（3）重悬细菌于100μl冰预冷的溶液I（50mM葡萄糖25mMTris-HCL（pH8.0），10mMEDTAPh8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2MNaOH1%SDS），混合内容物，不要振荡，置冰上；
（5）加150μl冰预冷溶液III（5MKac60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml），温和振荡10s置于阔步3-5min；
（6）40℃。12000rpm离心5min，转移上清；
（7）上清加等量酚；氯仿抽提，4℃，12000rpm离心2min，收集上清；
（8）加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；
（9）4℃，12000rpm，离心5min，弃上清；
（10）倒置离心管，倾干液体；
（11）1ml70%乙醇4℃洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；
（12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于-20℃。

碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

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