试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

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试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

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第1题：

常用于从转化菌中筛选DNA重组体的方法不包括

A、α互补筛选

B、插入失活筛选

C、杂交筛选

D、质粒的小量快速提取

E、DNA序列测定筛选

参考答案：D

第2题：

试述精液斑与血痕DNA提取方法的异同。

本题答案：1)异：
精液斑：必须要切断二硫键以消化蛋白(膜)→DTT(二硫苏糖醇)
血痕：有机溶剂orChelex-100
2)同：PK、SDS

第3题：

有关煮沸裂解法提取质粒DNA的叙述中，正确的是 ( )

A、该法是一种条件比较剧烈的方法

B、煮沸不能完全灭活核酸内酶A

C、适用于大多数E.coli菌株

D、不适用于表达endA的菌株

E、只能用于小质粒DNA(＜15kb)的小量制备

参考答案：ABCDE

第4题：

目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）

A、牙签少量制备法
B、小量一步提取法
C、SDS裂解法
D、碱裂解法
E、煮沸裂解法

正确答案:D

第5题：

质粒提取过程中SDS的作用是（）。

A.抑制DNA酶的活性
B.水解RNA
C.裂解细胞膜
D.维持渗透压
E.沉淀DNA

答案：C

解析：

SDS为表面活性剂，其作用是裂解细胞膜。

第6题：

常采用质粒DNA小量提取的方法是 ( )

A、碱裂解法

B、SDS裂解法

C、煮沸裂解法

D、酚抽提法

E、牙签少量制备法

参考答案：A

第7题：

在碱裂解法提取质粒时，用于沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.75%乙醇

D.异丙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第8题：

在碱裂解法提取质粒时，沉淀质粒DNA的试剂是

A.SDS

B.EDTA

C.异丙醇

D.75%乙醇

E.无水乙醇

参考答案：E

第9题：

有关煮沸裂解法提取质粒DNA的正确叙述是（）

A、该法是一种条件比较温和的物理方法
B、煮沸能完全灭活核酸内酶A
C、不适用于大多数Ecoli菌株
D、适用于HB101菌株
E、适用于<15kb的质粒DNA制备

正确答案:E

第10题：

碱裂解法制备质粒DNA的方法有哪些？

正确答案: （1）接种菌落于含抗生素的LB中，37℃剧烈振荡反应；
（2）培养液4℃12000rpm30min离心；
（3）重悬细菌于100μl冰预冷的溶液I（50mM葡萄糖25mMTris-HCL（pH8.0），10mMEDTAPh8.0）中剧烈振荡；（4）加200μl亲配制液溶液II（0.2MNaOH1%SDS），混合内容物，不要振荡，置冰上；
（5）加150μl冰预冷溶液III（5MKac60ml，冰乙酸11.5ml，水28.5ml），温和振荡10s置于阔步3-5min；
（6）40℃。12000rpm离心5min，转移上清；
（7）上清加等量酚；氯仿抽提，4℃，12000rpm离心2min，收集上清；
（8）加入2倍体积乙醇，振荡混合，室温放置2min；
（9）4℃，12000rpm，离心5min，弃上清；
（10）倒置离心管，倾干液体；
（11）1ml70%乙醇4℃洗涤沉淀，弃上清，空气中干燥10min；
（12）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE重新溶解核酸，振荡，贮于-20℃。

试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。

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