问答题简述酶的提取和结晶方法。

题目

问答题

简述酶的提取和结晶方法。

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相似问题和答案

第1题：

《中国药典》2010年版一部规定，机制冰片的来源是（）

A、菊科植物艾纳香的叶中提取的结晶
B、樟脑、松节油等经化学方法合成的结晶
C、樟科植物樟的新鲜枝、叶中提取的结晶
D、龙脑香科植物龙脑香树干提取的结晶
E、以上都不是

正确答案:B

第2题：

酶的提取方法有哪些？影响酶提取的主要因素有哪些？

正确答案:根据酶提取时所采用的溶剂或溶液的不同，酶的提取方法主要有盐溶液提取、酸溶液提取、碱溶液提取和有机溶剂提取等。
①盐溶液提取法：蛋白质在低浓度盐溶液中，其溶解度会随着盐溶液浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶这是因为蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电表层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度提高。
②酸溶液提取法：有些酶在酸性溶液中的溶解度比较大，且比较稳定，这类酶宜采用酸溶液提取，PH一般控制在2—6，针对酶的性质选择合适的PH，避免PH过低引起酶失活。
③碱溶液提取法：有些酶在碱性溶液中的溶解度比较大，且比较稳定，这类酶宜采用碱溶液提取，PH一般控制在8—12，针对酶的性质选择合适的PH，避免PH过高引起酶失活。
④有机溶剂提取法：一些和脂类结合比较牢固或分子中非极性侧链较多的酶蛋白难溶于水、稀盐、稀酸或稀碱中，则常用能够与水混溶的有机溶剂提取，如乙醇、丙酮、丁醇等。酶主要是蛋白质，影响蛋白质提纯的因素同样会影响酶的提纯，而在酶提取过程中最重要的就是要防止酶的变性失活。影响酶提取的最主要因素是酶在所用溶剂中的溶解度及酶向溶剂中扩散的难易。此外，在提取过程中还要注意一下因素的影响：
（1）温度：为防止酶的变性失活，提取时温度不宜过高。特别是采用有机溶剂提取时，整个提取操作应尽可能在低温下进行。
（2）PH：酶提取液的PH首先应保证蛋白质稳定，为了增加酶的溶解度，提取时溶液的PH应远离酶的等电点。（3）搅拌：搅拌能促进酶在提取液中的溶解，一般采用温和搅拌为宜，速度太快易产生大量气泡，增大了与空气的接触面，会引起酶蛋白的变性失活。
（4）污染：酶液是微生物生长的良好培养基，在提纯过程中应尽可能防止微生物对酶的破坏。
（5）提取液的体积：提取液的用量增加可提高提取率。但过量的提取液，使酶浓度降低，对进一步分离纯化不利。所以提取液的用量一般为含酶原料体积的3—5倍，少量多次，以得到较好的提取效果。

第3题：

蛋白质和酶的种类繁多，在提取时应根据其（）、（）及（）的不同选择不同的提取方法。

正确答案:存在的部位；分子结构；溶解性质

第4题：

结晶时酶液有什么要求？结晶方法有哪些？其原理又如何？

正确答案:结晶时对酶液有以下要求：
A.酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。如果酶液纯度太低，不能进行结晶。通常酶的纯度应当在50%以上，方能进行结晶。
B.酶在结晶时，酶液应达到一定的浓度。结晶时酶液浓度应当控制在介稳区，即酶浓度处于稍微过饱和的状态。
C.结晶过程中还要控制好温度、pH值、离子强度等结晶条件。
结晶方法与原理：
A.盐析结晶法：在适当的温度和pH值等条件下，于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度，使酶的溶解度慢慢降低，达到稍微过饱和状态，而析出酶晶体的过程。
B.有机溶剂结晶法：有机溶剂结晶是在接近饱和的酶液中慢慢加入某种有机溶剂，使酶的溶解度降低，而析出酶晶体的过程。
C.透析平衡结晶法：将酶液装进透析袋，对一定浓度的盐溶液进行透析，使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。
D.等电点结晶法：等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐达到酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。

第5题：

酶提取和分离纯化的方法有哪些？

正确答案: （一）根据酶分子溶解度不同的方法
（1）盐析沉淀法
（2）等电点沉淀法
（3）有机溶剂沉淀法
（二）根据酶分子大小和形状不同的方法
（1）离心分离法
（2）体积排阻法
（3）超滤
（三）根据酶分子电荷性质的方法
（1）离子交换层析
（2）等电聚焦电泳
（四）根据酶分子专一性结合的分离方法
（1）亲和层析

第6题：

简述蛋白质和酶提取、分离的一般原则。

正确答案: ①提取、分离方法条件要温和使目的蛋白质和酶的活性和功能不受损害
②尽量尽早除去各种杂质、脂类、核酸及毒素。
③设法除去变性的和不需要的蛋白质。
④设法提高目的蛋白质的含量或生物活性。
⑤分离纯化要在缓冲溶液中进行。
⑥建立灵敏、特异、精确的检测方法。
⑦根据其存在的部位、分子结构及溶解性质的不同选择不同的提取方法。

第7题：

酶的主要提取方法有四种，用于提取与脂质结合牢固的酶时用（）

A、盐溶液提取
B、酸溶液提取
C、碱溶液提取
D、有机溶剂提取

正确答案:D

第8题：

简述酶的提取和结晶方法。

正确答案: 提取方法：
（1）水溶液法：常用稀盐溶液或缓冲液提取。
（2）有机溶剂法：某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶变性，最常用的有机溶剂是丁醇。
（3）表面活性剂法：表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，可用于提取结合酶，此法用得较少。
结晶方法：盐析法；有机溶剂法；复合结晶法；透析平衡法；等电点法。

第9题：

简述糖的提取、纯化和分离方法。

正确答案:提取的方法是根据它们对水和醇的溶解度不同而采用不同的方法。如单糖包括小分子低聚糖可用水或50％醇提取；多糖根据可溶于热水，而不溶于醇的性质提取。纯化和分离方法：可用铅盐、铜盐沉淀法、活性炭吸附法、凝胶过滤法、离子交换层析法以及分级沉淀或分级溶解法等。

第10题：

简述酶结晶的主要方法和原理？

正确答案:（1）盐析结晶法：在适当的温度和PH值等条件下，于接近饱和的酶液中缓慢增加某种中性盐的浓度，使酶的溶解度缓慢降低，达到稍微过饱和状态，而析出酶晶体的过程
（2）有机溶剂结晶法：在接近饱和的酶液中缓慢增加某种有机溶剂，使酶的溶解度缓慢降低，而析出酶晶体的过程
（3）透析平衡结晶法：将酶液装进透析袋，对一定浓度的盐溶液进行透析，使酶液逐步达到过饱和状态而析出结晶的过程。前提：酶液要达到一定纯度（经过纯化）酶液要浓缩到一定浓度
（4）等电点结晶法：通缓慢加入浓酶液的PH值、使之逐渐达到酶的等电点，而析出酶晶体的过程

简述酶的提取和结晶方法。

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